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哪些因素會影響高效液相色譜柱的使用性能?

更新時間:2021-09-07      點(diǎn)擊次數(shù):2362
  高效液相色譜柱性能影響因素有很多,例如,硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑,化學(xué)性質(zhì)包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端,在選擇高效液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。
 
  1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。
 
  2. 如果樣品極性太強(qiáng),或酸性太強(qiáng);可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱(缺點(diǎn)是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否 則很難重復(fù)實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)。
 
  3. 若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留。
 
  4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng),或堿性太強(qiáng);可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡單,缺點(diǎn)是目前實 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強(qiáng)離子交換柱(缺點(diǎn) 是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實驗)也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱。

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